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LysoSensor Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)是一种用于测定溶酶体pH值的比率测量型探针，也是LysoTracker系列探针中的一种pH依赖型显示双激发和双发射波长的荧光探针，该探针在中性环境中产生蓝色荧光(Ex/Em=329nm/440nm)，但当所处环境变为偏酸性时，则发射黄色荧光(Ex/Em=384nm/540nm)。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。

LysoSensor系列探针是对活细胞中的酸性区室(如溶酶体、顶体精子)pH值进行检测的一类荧光探针，该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种向酸性可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强。因此，与LysoTracker系列探针相比，LysoSensor系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。

分子式	C20H22N4O3
分子量	366.4188
光谱特性	Ex=329nm,384nm；Em=440nm,540nm
pKa	~4.2
结构式

• 不能储存在无霜冰箱，建议按照单次用量分装于-20℃冻存。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 工作液的配制
  利用培养基或合适的缓冲液将1mM储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度至少为1μM；
  注：
  ① 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
  ② 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
  ③ 工作液现配现用。
  
• 染色
  
  • 对于贴壁细胞
    
    • 将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
      
    • 待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30min～2h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
      注：对LysoSensor YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1～5min才可用作pH指示剂。
      
    • 利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
  • 对于悬浮细胞
    
    • 离心，吸除上清。
      
    • 利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30min～2h(具体时间需根据细胞类型而定)。
      注：对LysoSensor YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1～5min才可用作pH指示剂。
      
    • 离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
      
    • 置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。
      注：对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。